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5-Brom-4-chlor-3-indoxyl-β-D-galactopyranosid
Aus Kefk.
| Strukturformel | |||
|---|---|---|---|
| Bild:5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-galactopyranoside.gif | |||
| Allgemeines | |||
| Name | 5-Brom-4-chlor-3-indoxyl-β-D-galactopyranosid (BCIG) | ||
| Andere Namen | X-Gal | ||
| Summenformel | C14H15BrClN | ||
| CAS-Nummer | 7240-90-6 | ||
| PubChem-Nummer | 65181 | ||
| Kurzbeschreibung | kristalliner Feststoff | ||
| Eigenschaften | |||
| Molmasse | 408,6 g·mol-1 | ||
| Aggregatzustand | fest | ||
| Dichte | 0,95 g/cm3 (in DMF gelöst) | ||
| Schmelzpunkt | -61 °C (in DMF gelöst) | ||
| Siedepunkt | 152°C (in DMF gelöst) | ||
| Dampfdruck | 3,5 hPa (20 °C, in DMF gelöst) | ||
| Löslichkeit | gut in DMSO und DMF | ||
| Sicherheitshinweise | |||
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| R- und S-Sätze | R: 20/21/22 S: ? | ||
| MAK | 30 mg/m3, 10 ml/m3 (DFG) | ||
Soweit möglich und gebräuchlich, werden SI-Einheiten verwendet. Wenn nicht anders vermerkt, gelten die angegebenen Daten bei Standardbedingungen.
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5-Brom-4-chlor-3-indoxyl-β-D-galactopyranosid wird auch als X-Gal bezeichnet. Es ist ein artifizielles, chromogenes Substrat für das Enzym β-Galactosidase.
Eigenschaften
Das Enzym β-Galactosidase hydrolysiert X-Gal zu Galactose und 5-Brom-4-chlor-Indoxyl. Das 5-Brom-4-chlor-Indoxyl wird vom Sauerstoff der Luft zum tiefblauen Farbstoff 5,5'-Dibrom-4,4'-dichlor-Indigo oxidiert.
Verwendung
In der Biochemie wird X-Gal zur qualitativen Bestimmung der Aktivität der β-Galactosidase benutzt. Zur quantitativen Bestimmung wird dagegen das Substrat o-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid (ONPG) verwendet.
In der Molekularbiologie wird X-Gal im Blau-Weiß-Screening verwendet. In vielen Klonierungsvektoren liegt in der aminoterminalen codierenden Sequenz der β-Galactosidase (α-Fragment) eine Multiple Cloning Site, in die Fremd-DNA, wie z.B. PCR-Fragmente, eingebracht werden können. Dadurch wird die Gensequenz der β-Galactosidase unterbrochen und das Enzym wird nicht mehr exprimiert. Daraus folgt, dass das X-Gal nicht mehr gespalten wird und somit auch kein blauer Farbstoff entsteht. Die nach der Transformation entstandenen Kolonien erscheinen dann nicht blau, wie die mit leerem Vektor, sondern weiß. X-Gal wird häufig in Verbindung mit IPTG (zur Induktion des lac-Promotors) zur Selektion von blauen Kolonien verwendet. Es wird auch für die Selektion von β-Galactosidase Reporter-Gen Aktivitäten in Transfektionen von eukaryotischen Zellen und für den Nachweis von β-Galactosidase in der Immunologie und histochemischen Anwendungen benutzt.
Andere chromogene Substrate:
- 5-Brom-3-indolyl-β-D-galactopyranosid (Blue-Gal, Bluo-Gal)
- 6-Chlor-3-indolyl-β-D-galactopyranosid (Y-Gal, Red-Gal, Rose-Gal, Salmon-Gal)
- 5-Iod-3-indolyl-β-D-galactopyranosid (Purple-Gal)
- 5-Brom-6-chlor-3-indolyl-β-D-galactopyranosid (Magenta-Gal)
- N-methylindolyl-β-D-galactopyranosid (Green-Gal)
Andere fluorogene Substrate:
- 4-Methyl-umbelliferyl-β-D-galactopyranosid (MUG) (λex = 365 nm, λem = 455 nm)
Literatur
- Sambrook, J.; Maniatis, T.; Russel, DW. : Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press; 3rd edition (2001) ISBN 0-8796-9577-3
- Horwitz, J.P. et al. (1964). Substrates for Cytochemical Demonstration of Enzyme Activity. I. Some Substituted 3-Indolyl-β-D-glycopyranosides. J Med Chem. 53, 574-575.
- Edwards, M.J., and Taylor, M.F. (1993). Substitution of DMSO for DMF as a Solvent for X-Gal. BioTechniques, 14, 234.
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