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O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid
Aus Kefk.
| Strukturformel | |||
|---|---|---|---|
| Bild:ONPG.gif | |||
| Allgemeines | |||
| Name | o-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid (ONPG) | ||
| Andere Namen | 2-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid | ||
| Summenformel | C12H15NO8 | ||
| CAS-Nummer | 369-07-3 | ||
| PubChem-Nummer | 123646 | ||
| Kurzbeschreibung | - | ||
| Eigenschaften | |||
| Molmasse | 301,25 g/mol | ||
| Aggregatzustand | fest | ||
| Dichte | - kg/m3 | ||
| Schmelzpunkt | 186 - 193 °C | ||
| Siedepunkt | - °C | ||
| Dampfdruck | - Pa (x °C) | ||
| Löslichkeit | - | ||
| Sicherheitshinweise | |||
| R- und S-Sätze | R: ? S: ? | ||
| MAK | - | ||
Soweit möglich und gebräuchlich, werden SI-Einheiten verwendet. Wenn nicht anders vermerkt, gelten die angegebenen Daten bei Standardbedingungen.
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o-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid, abgekürzt ONPG, ist ein artifizielles, chromogenes Substrat für das Enzym β-Galactosidase.
Eigenschaften
Das Enzyms β-Galactosidase hydrolysiert ONPG zu Galactose und dem gelben Farbstoff o-Nitrophenol.
Verwendung
In der Biochemie wird ONPG zur quantitativen Bestimmung der Aktivität der β-Galactosidase verwendet.
Das natürliche Substrat der β-Galaktosidase ist das Disaccharid Laktose. Ähnlich wie X-Gal, das für die qualitative β-Galaktosidasebestimmung verwendet wird, ist ONPG ist Laktosederivat, das für die β-Galaktosidase ein chromogenes Substrat darstellt.
In einem Reaktionsansatz entstehen nach der hydrolytischen Spaltung des farblosen ONPG Galaktose und das gelbgefärbte o-Nitrophenol. Das ONPG muss im Überschuss im Ansatz vorhanden sein. Die Intensität der Gelbfärbung variiert mit der Konzentration der β-Galaktosidase und der Reaktionsdauer. Durch Zugabe von Natriumcarbonat (Verschiebung des pH-Werts in den basischen Bereich (pH 11)) wird die Reaktion abgestoppt, da β-Galaktosidase bei hohen pH-Werten inaktiv ist. Die mit bloßem Auge sichtbare Gelbfärbung sollte nicht zu intensiv sein und sich zwischen 15 Minuten und sechs Stunden nach Reaktionsstart bilden.
Die Menge des entstandenen o-Nitrophenols wird durch Absorption in einem Photometer bei 420 nm bestimmt. Aus der Reaktionsdauer und dem Absorptionswert kann die Aktivität der β-Galaktosidase berechnet werden.
Literatur
J.H. Miller Assay of β-Galactosidase, In J.H. Miller Experiments in Molecular Genetics, pp. 352-355, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 1972, ISBN 0-87969-106-9
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